Фотометрический метод
Фактор XIII - фермент трансглютаминаза, которая образует поперечные сшивки между пептидами. При этом изопептидные связи образуются между остатками глютамина и лизина, в реакции освобождается аммиак. Последний определяется в ферментной реакции с глютаматдегид-рогеназой (ГлДГ) и α-кетоглютаратом, кофактором реакции является НАДН, окисляющийся до НАД (рис. 108). Измерение проводится фотометрически при длине 340 нм, метод может выполняться на биохимических анализаторах.
Инкорпорирующий метод
Разработан новый метод определения фактора XIII, основанный на введении субстрата в
иммобилизированный белок, которое обеспечивается фактором ХIIIа. Раньше иммобилизовался казеин. В новом методе используется физиологический субстрат-фибрин. Фактор ХIIIа инкорпорирует субстрат 5-(биотинамидо)-пен-тиламин (БАПА) в фибрин, который определяется количественно с конъюгатом стрептави-дин-щелочная фосфатаза (рис. 109). Инкорпорирующий метод позволяет оценивать физиологическую роль мутации Val34Leu фактора XIII, которая сочетается с риском внутричерепных кровоизлияний и кровотечений из внутренних органов. В то же время больные с этой мутацией фактора XIII практически не страдают инфарктом миокарда и венозными тромбозами. Мутацию Val34Leu фактора XIII не выявляет фотометрический метод. Инкорпорирующий метод может с успехом использоваться для мо-ниторирования больных с очень низким уровнем ф.ХIII, что бывает при наследственных дефицитах.
|
Рис . 108. Принцип определения фактора XIII фотометрическим методом
Рис . 109. Принцип определения фактора XIII инкорпорирующим методом. БАПА - 5-(биотинамидо)-пентиламин, ЩФ-щелочная фосфатаза
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
Тесты для определения гепарина
Антикоагулянты прямого действия широко используются для профилактики и лечения тром-боэмболической болезни. Традиционный тест АЧТВ полезен для контроля за лечением гепарином, когда гепарин применяется в относительно низких концентрациях (описан выше). При высоких дозах гепарина, например при операциях на открытом сердце или при диализе, АЧТВ не позволяет следить за эффектами гепарина. Анти-коагулянтное действие низкомолекулярного гепарина АЧТВ не улавливает.