Окраска по Романовскому-Гимзе

Дата: 2025-05-25; Просмотры: 26

Оценка:

0.00 из 5.00 — оценок

Скачиваний: 0

Скачать

Реактив: готовая краска Романовского. В её состав входит азур-II (смесь равных частей азура-I и метиленового синего) и эозин. Заводская краска очень концентрированная и перед употреблением её нужно разводить. Степень разведения и время окраски определяется опытным путем и называется титрование краски Романовского.

Титрование краски Романовского. Готовят три разведения краски из расчета: 1, 2 и 3 капли красителя на 1мл дистиллированной воды. Каждым из разведений окрашивают 5 зафиксированных мазков в течение 20, 25, 30, 35 и 40 минут. На каждом мазке отмечают время окраски и разведение красителя. После окрашивания микроскопируют мазки и определяют разведение и время, при которых получена наилучшая окраска. Эти условия, соответствующие лучшему окрашиванию, указывают на этикетке бутыли с краской. Например: титр краски – 1капля/мл; экспозиция – 30 минут. Титрование краски Романовского проводят один раз перед использованием каждой новой партии красителя.

Ход окраски.В специальную кювету для окрашивания наливают раствор краски Романовского, приготовленный непосредственно перед использованием в соответствии с установленным титром. В рабочий раствор красителя опускают штатив с сухими фиксированными мазками. Красят мазки в соответствии с выбранной экспозицией. Промывают мазки проточной водой и высушивают на воздухе.

3. Анализ эпизоотической ситуации по анаплазмозу крупного рогатого скота в Кильмезском районе Кировской области.

В Кильмезском районе на момент проведения экспериментальных исследованийв 2019-2020 г, случаев заболевания анаплазмозом крупного рогатого скота не выявлялось. Плановые исследования крови проводятся во всех хозяйствах 1 раз в год осенью после постановки животных на стойловый период. Последний случай заболевания в районе был выявлен в 2008 году в СПК к-з «Заря».

Историческая справка заболевания. В 2008 году в Кильмезскую ветеринарную лечебницу обратился ветеринарный врач СПК (к-з) «Заря» с тем, что у коров в хозяйстве заметно понизились удои, животные при нормальном кормлении худеют и у некоторых повышается температура до 41 градуса, пало 2 головы, при вскрытии на внутренних органах особых изменений обнаружено небыло. Труп был истощён. При сборе анамнеза, выяснилось, что в этом году было очень много животных, укушенных клещами. Было принято решение провести микроскопию мазков крови. При микроскопическом исследовании был выявлен возбудитель анаплазмоза. И животным с клиническими признаками назначено лечение: в виде антибиотикотерапии тетрациклинового pяда (террамицин, тетрациклин), окситетрациклин и тетрациклин. После проведённого лечения кровь из неблагополучного хозяйства была снова отправлена в лабораторию, возбудитель анаплазмоза не обнаружен.

В настоящее время в хозяйстве проводятся мероприятия по профилактике анаплазмоза.

4. Разработка мероприятий по совершенствованию профилактической и лечебной деятельности

Таблица №1. План лечебно-профилактических мероприятий против анаплазмоза крупного рогато скота в к-зе «Заря».

5.Профилактические мероприятия ,оптимальные методы лечения оптимальные методы диагностики .

Диагноз.Диагноз на анаплазмоз ставят на основании эпизоотического состояния местности, сезона года, клинических признаков болезни и результатов микроскопического исследования мазков крови по Романовскому на наличие анаплазм. Разработаны серологические методы диагностики (РА,РСК,РИФ). Больные и недавно переболевшие животные дают положительную реакцию в титрах от 1:80 до 1:280 и выше, у паразитоносителей – от 1:10 до 1:40. Диагноз считается установленным, если будут обнаружены анаплазмы в мазках крови.

Микроскопически диагноз ставят на основании обнаружения паразитов в мазках крови от больного и подозрительного по заболеванию животного.

Мазки фиксируют метиловым спиртом (3 - 5 минут) или этиловым (20 - 25 минут), или смесью этилового спирта и серного эфира в равных количествах (10 - 15 минут). После высушивания мазки окрашивают по методу Романовского (краска Гимза 1 - 2 капли на 1 мл воды, лучше слабощелочной или нейтральной реакции), азур-эозином или ускоренным способом по Анаплазмы окрашиваются в темно-красный цвет, имеют округлую форму (похожи на точки), расположены преимущественно по периферии эритроцита. Размеры паразитов от 0,2 до 1,2 мк.

Степень пораженности эритроцитов бывает различной - от незначительной до 50% и более зараженных эритроцитов. В отличие от телец Жолли анаплазмы обычно мельче и менее интенсивно окрашены.

Реакция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса)

Различают три основные разновидности метода:

1. прямой,

2. непрямой

3. с ком­плементом.

Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антиге­нов микробов или определения антител.

Прямой метод РИФоснован на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, ме­ченными флюорохромами, способны светить­ся в УФ-лучах люминесцентного микроскопа.

Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по пери­ферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФзаключается в вы­явлении комплекса антиген—антитело с по­мощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабаты­вают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, от­мывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобули­новой (антикроличьей) сывороткой, мечен­ной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела +антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Реакция связывания комплемента (РСК) за­ключается в том, что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют иммун­ный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комп­лексом антиген—антитело.

Если же комплекс антиген—антитело не образуется, то комп­лемент остается свободным.

РСК проводят в две фазы:

1-я фаза — инкубация смеси, содержащей три компонента антиген + антитело + комплемент;

2-я фаза (инди­каторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемоли­тической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содер­жащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антите­ло происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизирован­ных антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная. Если антиген и ан­титело не соответствуют друг другу (в иссле­дуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемо­лиз; реакция отрицательная.

Дифференциальный диагноз. Анаплазмоз необходимо дифференцировать от пироплазмоза, тейлериоза, бабезиоза, лептоспироза и сибирской язвы.

Лечение. Больных животных оставляют в помещениях, назначают диетические корма. Применяют симптоматическое лечение в зависимости от показаний.

При анаплазмозе в качестве специфического препаратов используются антибиотики тетрациклинового ряда - такие как тетрациклин, хлортетрациклин (биомицин), окситетрациклин (террамицин) и антибиотики нового поколения (окситетра-200, оксигель, тетрадур).

Профилактика и меры борьбы . Для успешной профилактики анаплазмоза необходимо сочетание общих ветеринарно-санитарных мероприятий и специфических противо-анаплазмозных мер.

Профилактические мероприятия в неблагополучных хозяйствах

Диспансеризация поголовья проводится двукратно: перед выгоном на пастбище и после постановки животных в стойла. У всех животных хозяйства исследуют кровь в РДСК на анаплазмоз, проводят микроскопию мазков крови. Больных животных изолируют и лечат, с последующим выпасанием их на изолированных пастбищах пожизненно.

Приплод от больных коров должен обследоваться на анаплазмоз в течение первых двух-трех месяцев жизни, ввиду возможности трансплацентарного заражения. Целесообразно выделение для них отдельной фермы. По возможности эти животные, как резервуар возбудителя, должны выбраковываться. Все остальные животные обрабатываются инсектоакарицидными препаратами непосредственно перед выгоном на пастбище и после постановки в стойла, а при высокой заклещеванности и дополнительно. После постановки животных в стойла проводится вакцинация всего здорового поголовья инактивированной эмульгированной вакциной в дозе 0, 5 -3 мл п/к, двукратно, с интервалом между введениями 45 сут. Продолжительность иммунитета 12 мес. Следует максимально ограничить вывоз животных из хозяйства. Все вывозимые животные должны в обязательном порядке обследоваться на анаплазмоносительство серологически и микроскопией мазков крови.

Заключение.

С целью усовершенствования мер борьбы с анаплазмозом крупного рогатого скота рекомендуется проведение следующих мероприятий:

1. Для предотвращения нападения клещей выпас животных производить на более открытых участках лесных массивов с мая и по сентябрь включительно. В целях снижения клещевой инвазии необходимо обрабатывать животных до начала пастбищного периода акарицидными препаратами, желательно. После выгула осматривать поверхность тела животного, используя скребки и жесткие щетки для вычесывания клещей, которых в последующем уничтожать в растворах инсектоакарицидов.

С целью профилактики анаплазмоза и диагностики паразитоносительства рекомендуется производить серологические плановые исследования крупного рогатого скота, особенно в апреле и ноябре. На основании результатов сравнительного испытания лечебной эффективности антибиотиков тетрациклинового ряда, рекомендую использовать тетрациклин в дозе 1 мг на кг массы тела животного.

Список литературы:

1. Скорнякова О.О. Методические указания для студентов очной и заочной формы обучения по специальности ветеринария , 2016

2. Третьяков А.Д. Ветеринарное законодательство, Агропромиздат ,1988

3. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.В. и др. Паразитология и инвазионные заболевания животных / - М.: Колос, 2008.

4. Акбаев М.Ш.,,Практикум по диагностике инвазионных болезней животных ,Колос, 1994

5. Бакина Е.Б., Скорнякова О.О. Современные антигельминтики и их применение в ветеринарной практике , Киров, 2005.

6. Мероприятия по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами ( Инструкция , Информагротех,1999

7. Субботин В.М. Современные лекарственные средства в ветеринарии/ В.М. Субботин, С.Г. Субботина, И.Д. Александров. - Ростов-на-Дону: "Феникс", 2001.

8. Дьяконов, Л.П Ветеринарная паразитология: учебное пособие для вузов/ Дьяков Л.П., Косминков Н.Е., и др. - М.: Мир дому твоему, 1999.

9. Непоклонов А.А Химические средства защиты животных: учебное пособие для вузов/ Непоклонов А.А. - М.: Россельхозиздат, 1971.

10. Жаров, А.В Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных: учебное пособие для вузов/ Жаров А.В., Шишков В.П., Жаков М.С. и др., - 4е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 2003.

11.Скорнякова О.О., Белозеров С.Н. Основы терапии и профилактики паразитарных болезней животных (по Кировской области) – Киров, 2016.

12 .Российский ветеринарный журнал №1 2016 г Георгиу Х., Скорнякова О.О. Видовая идентификация кровепаразитов крупного рогатого скотав Кировской области .

Приложения

СОПРОВОДИТЕЛЬНАЯ

НА АНАЛИЗ НАПРАВЛЯЮТСЯ ПРОБЫ:_крови от крупного рогатогоскота в количестве 20 проб _________________________________ _________________________________________________________

НЕОБХОДИМО ПРОВЕСТИ ИССЛЕДОВАНИЕ __на__анаплазмоз________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

ДАТА 17.02.2020 подпись