Определение количества эритроцитов и лейкоцитов
Оборудование и реактивы:
1. смесители (меланжеры) или пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов.
2. 3% - раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема.
3. 3% раствор уксусной кислоты.
4. Счетная камера.
Смесители представляют собой капиллярную пипетку с расширением- ампулой, содержащей бусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчета эритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистой ампулой на них нанесены метки одна - 0,5 другая - перед входом в ампулу - 1.0, третья - у выхода из ампулы - 101.
При набирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набирании до 1,0 - в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор поваренной соли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов. Смеситель для лейкоцитов имеет более широкий просвет капилляра и меньшую по величине ампулу. Нанесены три метки: 0,5 , 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 Раз). Для разведения лейкоцитов используют 3 - 50% раствор уксусной кислоты. Уксусная кислота растворяет эритроциты, что позволяет вести подсчет только лейкоцитов.
Счетная камера.
Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм. Счетная камера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждой половине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновь камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по 4 квадрата. Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп (5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.
Ход исследования:
Для подсчета эритроцитов берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легким насасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5. Избыток крови удаляют фильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленный заранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасывают раствор, заполняя всю ампулу до метки 101. Тотчас снимают резиновую трубку, зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем и встряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают
1-2 капли и выпускают последующую каплю на сетку.
Для подсчета лейкоцитов кровь из места укола набирают до метки 0,5, затем разводят 3% раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 минут, после чего сливают
1-2 капли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками
для подсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкости Гайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови,
отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробирку наливают 0,4 мл 3 - 5% раствора
уксусной кислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку из гемометра Сали и,
набрав содержимое, заполняют счетную камеру.
Заполнение счетных камер:
Хорошо вымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающие боковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверх и вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновы кольца. Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители. выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку между камерой и покровным стеклом. Жидкость по капиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой. Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится, то ее удаляют фильтровальной бумагой.
Определение уровня гемоглобина проводят в упрощенном колориметре — гемометре Сали. Этот прибор состоит из пластмассового штатива с 3 вертикальными гнездами. В боковых гнездах находятся 2 запаянные пробирки со стандартной жидкостью.
Опредение гемоглобина по Сали
Определение уровня гемоглобина проводят в упрощенном колориметре — гемометре Сали. Этот прибор состоит из пластмассового штатива с 3 вертикальными гнездами. В боковых гнездах находятся 2 запаянные пробирки со стандартной жидкостью.
В среднее гнездо гемометра вставляют открытую сверху градуированную стеклянную пробирку того же диаметра, что и цветные стандарты. Градуированная пробирка имеет шкалу с делениями, показывающую количество гемоглобина в граммах на 100 миллилитров крови, то есть грамм-процентах (г%).
При геометре имеются специальная пипетка для воды и стеклянная палочка для перемешивания.
В градуированную пробирку наливают до деления, помеченного цифрой «2 грамм-процента» (нижняя круговая метка) 0,1 грамм-процента раствора хлористоводородной кислоты. Затем набирают кровь в капиллярную пипетку до метки «0,02 миллилитра», всасывая е ртом через резиновую трубку. Обтерев кончик пипетки снаружи ватой, опускают ее в пробирку с 0,1 грамм-процента раствором хлористоводородной кислоты и осторожно выдувают кровь.
Повторными всасываниями и выдуваниями верхнего слоя жидкости пипетку ополаскивают. Пробирку несколько раз встряхивают и, заметив время, ставят в штатив. Для полного превращения гемоглобина в хлорид гематита требуется не менее 5 минут. Через 5 минут геометр поднимают до уровня глаз и сравнивают цвет испытуемой жидкости с цветом стандартов.
С помощью неградуированной пипетки к испытуемому раствору добавляют по каплям дистиллированную воду, перемешивают стеклянной палочкой и сравнивают со стандартами. Как только цвет исследуемой жидкости станет одинаков с цветом стандартов, отмечают, какому делению шкалы соответствует уровень жидкости (по нижнему мениску) в пробирке.
Исследования проб крови от животных до введения показали, что уровень эритроцитов в 1и 2 группах практически не изменился и остался в пределах физиологической нормы, при этом произошло незначительное увеличение гемоглобина и достоверное увеличение количества лейкоцитов контрольной 1 и 2 группе в сравнении с исходными данными.
При введении препаратов контрольной группе значительное повышение числа гемоглобина отмечалось в 1-й группе (по сравнению с показателями до начала опыта), эритроцитов же - во 2-й где применялась другая схема лечения, а наивысший уровень лейкоцитов был в контрольной группе, где его не применяли.
При исследованиях было использовано две группы кошек по 5 голов в каждой. В первой группе животных задавали схему лечения: В 1группе за весь период эксперимента признаки уроцистита не были зарегистрированы. В 2 группе на второй день опыта у одного животного регистрировали вялость и вынужденную позу при акте мочеиспускания. У этого животного отмечалось общее угнетение, понижение аппетита. Больной кошке второй группы применили схему лечения первой или контрольной группы. К 9 дню опыта в 2 группе заболеваемость составила 60%. Следовательно, всем кошкам 2 группы применили препараты контрольной группы.
Заключение
При прохождении научно-исследовательской практики на базе на базе ОГБУ «Челябинская ветеринарная станция по борьбе с болезнями животных» г.Челябинск., я происследовала 2 группы кошек больных уроциститом, и провела сравнение между двумя схемами лечения уроцистита.
У исследуемых животных контрольной и опытной групп была взята кровь, как до эксперимента, так и после него.
Животным контрольной группы применяли препараты: энрофлон, папаверин, гамавит.
Опытной группе применяли амикацин, но-шпа в иньекциях и риботан.
В результате исследований было установлено, что схема лечения контрольной группы как по морфологическим, так и по клиническим симптомам оказал эффективное действие по профилактике и лечению уроцистита кошек по сравнению с опытной.
Список используемых источников
1.Бурмистров, Е.Н Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели/ Е.Н. Бурмистров, Н.А. Гришина, И.П. Бакланова, Ю.Д. Юрьева, С.А. Исаев, С.А. Нечаев- М.: Вет. Лаборатория «Шанс», 2004. С.46-52.
2.Громова, О.В. Диагностика, лечение и профилактика уролитиаза кошек/ О.В. Громова //Тезисы докладов MB А им. К.И.Скрябина. -Москва, 1999.-С.124-125.
3.Данилова, JI.A. Анализы крови и мочи/ JI.A. Данилова. 3-е изд., перераб. и доп. - СПб.: Салит-Медкнига, 2000. - 128с.
Динченко, О.И. Особенности уролитиаза собак и кошек в условиях мегаполиса (распространение, этиология, патогенез, диагностика и терапия):Автореф. Дис. .кан.вет.наук/ О.И. Динченко. Москва, 2005. -16с.
4.Лопатин, Н.А. Урология/ Н.А. Лопатин, А.Ф. Даренков, В.Г. Горюнов и др.// Под ред. Н.А. Лопаткина. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1992. - 496с.: ил.
5.Строн, П.А. Мочекаменная болезнь/ П.А. Строн// оригинал статьи на сайте: «НПП Резонанс» www.npl rez.ru. — 2004.
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«ЮЖНО-УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ
Кафедра незаразных болезней
РАБОЧИЙ ДНЕВНИК
научно-исследовательской работе
студента (ки) 5 курса __53_ группы
факультета ветеринарной медицины
Лукина Виктория Евгеньевна
Троицк 2018