Критерии оценки микробной обсеменённости воздуха в хирургических клиниках.
| Место забора | Условия работы | Общее кол-во колоний в 1м3 воздуха | Количество патогенного стафилококка в 250 литрах |
| Операционные | До начала работы | Не выше 500 | Не должно быть |
| Во время работы | Не выше 1000 | Не должно быть |
Исследования микробной обсеменённости объектов внешней среды.
Бактериологическое исследование микробной обсеменённости объектов внешней среды предусматривает выявление стафилококка, синегнойной палочки, бактерий группы кишечных палочек и аэромонад (строго по показаниям). Забор проб с поверхностей различных объектов осуществляют методом смывов.
Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками размером 5х5 см. простерилизованными в бумажных пакетах или в чашках Петри. Для увлажнения тампонов в пробирки наливают по 2,0 мл стерильного физиологического раствора. При использовании салфеток стерильный физиологический раствор разливают в стерильнае пробирки по 2,0 мл. Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют физиологическим растворм из пробирки, после протирания исследуемого объекта помещают в ту же пробирку.
При контроле мелких объектов смывы забирают с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100-200см2.
Для выделения стафилококков делают посев непосредственно на чашку Петри с ЖСА. Кроме того, в качестве среды накопления используют бульон с 6,5% хлористого натрия, бульон с 1% глюкозы, разлитые в пробирки по 0,5 мл, в которые засевают по 0,2-0,3 мл смывной жидкости. Засеянные пробирки инкубируют при 37°С в течении 20-24 часов, после чего делают высев на ЖСА.
Для выявления бактерий группы кишечных палочек производят посев на среду обогащения, для чего тампоны (марлевую салфетку) погружают в 10-20% желчный бульон или среду Кесслера. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо. Подозрительные колонии на среде Эндо микроскопируют и пересевают на 2-ую бродильную пробу – среду Гисса с глюкозой. Среду выдерживают 24 часа при 43°С.
Примечание: при использовании свиной желчи для приготовления желчного бульона, концентрация желчи должна быть в 20 раз меньше.
Для выявления синегнойной палочки специальные посевы можно не производить. Обычно колонии синегнойной палочки удаётся выявить на кровяном агаре или на среде Эндо. Колонии, подозрительные на синегнойную палочку, пересевают на скошенный агар, содержащей 2-5% глицерина или маннита. Колонии синегнойной палочки дают на поверхности скошенного агара обильный рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенции с характерным медовым запахом. Выделенную культуру окрашивают по Граму, микроскопируют, определяют гемолитические свойства путём высева на чашку с кровяным агаром.
Ориентировочный перечень объектов, подлежащих бактериологическому контролю:
А. Наркозная комната.
1. Интубационная трубка
2. Маска для наркозного аппарата
3. Тройник наркозного аппарата
4. Гофрированная трубка
5. Ларингоскоп
6. Роторасширитель
7. Дыхательный мешок
8. Руки врачей анестезиологов-реаниматологов, сестёр-анестезистов
Б. Предоперационная
1. Тазы для мытья рук хирургов
2. Чистые щётки для мытья рук
3. Фартуки (клеёнчатые или полиэтиленовые)
В. Операционная
1. Рабочий стол анестезиологов
2. Операционный стол
3. Шланг вакуумнасоса
4. Шланг кислородной подводки
5. Смывы с рук всех участвующих в операции
6. Кожа операционного поля
Г. Послеоперационные палаты, отделения
и палаты реанимации и интенсивной терапии
1. Кровать, подготовленная для больного
2. Полотенце для рук персонала и смывы с рук
3. Щётка на раковине
4. Шланг кислородной подводки
5. Запасная наркозная аппаратура (набор реанимационной укладки)
6. Шланг вакуумотсоса
7. Внутренняя поверхность холодильника (для хранения лекарств)
8. Градусники
Д. Перевязочная
1. Кушетка для перевязок
2. Полотенце для рук персонала
3. Щётка на раковине
4. Халат медицинских сестёр
5. Рабочий медицинский стол
6. Внутренняя поверхность холодильника для хранения лекарств
Правила отбора проб для контроля стерильности в ЛПУ.
Забор проб на стерильность проводит операционная сестра под руководством сотрудника бактериологической лаборатории, в стерильные ёмкости с соблюдением строжайших правил асептики непосредственно перед проведением операции.
Для контроля стерильности используют следующие питательные среды:
· Сахарный бульон Хоттингера (0,5 и 1% глюкозы)
· Тиогликолевую среду
· Бульон Сабуро
Одновременный посев изделий на 3 вышеуказанные среды обязателен. При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду количество среды в пробирке должно быть достаточным для полного погружения изделия или его части.
Посевы в бульон Хоттингера и тиогликолевую среду выдерживают в термостате при температуре 37˚С, среду Сабуро – при температуре20-22˚С. Посевы инкубируют в термостате в течении 14 суток.
Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах
Требования к помещению для посева на стерильность.
Посев исследуемого материала желательно проводить в настольных боксах с ламинарным потоком воздуха. Эти боксы размещают в отдельных помещениях бактериологической лаборатории.
При отсутствии боксов с ламинарным потоком воздуха, контроль стерильности проводят в боксированных помещениях. Общая площадь бокса должна быть не менее 3 м2.
В боксированном помещении стены должны быть окрашены масляной краской и выложены кафельной плиткой, не должны иметь выступов, карнизов, трещин; пол в боксе и рабочий стол должны быть покрыты линолеумом, стенки и ножки стола покрашены масляной краской.
Боксы оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией, в них подаётся стерильный воздух, проходящий через бактериальные фильтры с материалом Петрянова.
В боксе и предбокснике устанавливают настольные (БОН) и потолочные (ОБП) ультрафиолетовые облучатели из расчёта вт. удельной мощности ламп, создающих прямое излучение на 1 м2 помещения. Облучатели размещают на высоте 2-2,5 м от пола.
Для тушения пожара в боксированном помещении должны быть в наличии противопожарные средства, углекислотные огнетушители типа ОУ-2 из расчёта один огнетушитель на предбоксник и бокс.
Подготовка бокса, инструментов и персонала к работе.
Ежедневно до проведения работы помещения бокса и предбоксника подвергают тщательной обработке. Стены, пол, поверхности инвентаря протирают раствором, содержащим 3% перекиси водорода и 0,5% моющего средства. В случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм микроорганизмов, влажную уборку проводят 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства.
Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают также, как и помещение бокса. Через 45-60 минут после обработки в бокс вносят все необходимые для работы инструменты и материалы кроме образцов продукции.
Перед внесением материалов в настольном боксе включают вентиляцию на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха в нём.
За 1,5-2 часа до начала работы в боксе включают бактерицидные лампы.
Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют, а тканевые изделия обрабатывают при следующем режиме: температура 132˚С±2˚С. время стерилизационной выдержки – 20мин., изделия из резины (перчатки и т.д.) – при температуре 120˚С±2˚С в течении 45 минут.
В процессе работы вспомогательный инструмент –2-3 раза заменяют новым стерильным комплектом.
Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки тёплой водой с мылом и щёткой, вытирают стерильным полотенцем, одевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-х слойные маски, шапочки, стерильные перчатки.
В процессе посева в боксе регулярно проверяют обсеменённость воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с МПА, открывая их на 15 минут, затем чашки помещают в термостат при температуре 37˚С на 48 часов. Допускается рост на более трёх колоний неспорообразующих сапрофитов.
В случае роста на чашках более трёх колоний проведение дальнейших работ в данном боксе запрещается. В боксе дополнительно проводят тщательную уборку 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства.
Контроль стерильности изделий проводят путём погружения в питательные среды. В исключительных случаях, когда необходимо проверить стерильность инструмента больших размеров, пробы забирают методом смыва, стерильной марлевой салфеткой размером 5х5 см2, предварительно увлажнённой стерильным физиологическим раствором или стерильной водой.
Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В пребокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, обильно смоченной 65 раствором перекиси водорода, перекладывают на стерильный лоток и оставляют на 30 минут. При поступлении изделий в мягкой упаковке, первый слой снимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.
Посевы на стерильность проводят бактериолог с помощью лаборанта.