Культуральный метод
Метод посева, или культуральный метод, отличается большей чувствительностью. Он позволяет обнаруживать несколько десятков жизнеспособных микобактерий в исследуемом материале и имеет большую диагностическую ценность.
К недостаткам методов культивирования следует отнести их длительность (срок ожидания материалов достигает 10 нед), более высокую стоимость, сложность обработки диагностического материала.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Для культивирования микобактерий используют различные питательные среды: плотные, полужидкие, жидкие.
В качестве стандартной среды для первичного выделения возбудителя туберкулёза и определения его лекарственной чувствительности ВОЗ рекомендует среду Левенштейна-Йенсена. Это плотная яичная среда, на которой рост микобактерий получают на 20-25-й день после посева бактериоскопически положительного материала. Посевы бактериоскопически отрицательного материала требуют более длительного периода инкубации (до 10-12 нед).
В нашей стране широкое распространение получила предложенная Э.Р. Финном яичная среда Финн-II. Она отличается тем, что вместо L-аспарагина в ней используют глутамат натрия, запускающий иные пути синтеза аминокислот микобактерий. Рост появляется на этой среде несколько раньше, а частота выделения микобактерий на 6-8% выше, чем на среде Левенштейна-Йенсена.
Для повышения эффективности бактериологической диагностики внелёгочного туберкулёза целесообразно включать в комплекс питательных сред модифицированные среды Финн-II. Для ускорения роста в питательную среду Финн-II дополнительно вводят натрий тиогликолат 0,05%, снижающий концентрацию кислорода. Для защиты ферментных систем микобактерий от токсичных продуктов перекисного окисления липидов в питательную среду Финн-II вводят антиоксидант α-токоферола ацетат в концентрации 0,001 мкг/мл. Посев диагностического материала производят по стандартной методике.
ОБРАБОТКА МАТЕРИАЛА И ТЕХНИКА ПОСЕВА НА МБТ
Обработка материала. Диагностический материал в соотношении 1:1 заливают раствором 10%-ного фосфата или 1—3—5%-ной серной кислотой. При обработке фосфатом натрия материал разбивается стеклянными бусами при перемешивании стерильной стеклянной палочкой до полной гомогенизации. Если гомогенизация мокроты достаточная, то при перемешивании палочкой она быстро разрывается, а не тянется. В последнем случае раствор фосфата добавляется до полной гомогенизации. При наличии встряхивателя в бактериологическом пункте следует встряхивать материал в течение 10—15 минут после заливки фосфата. Обработка фосфатом или 1%-ным раствором серной кислоты длится 24 часа при комнатной температуре или при 37 °С в термостате.
При обработке 3—5%-ной серной кислотой материал должен контактировать с последней не более 20 минут, считая время центрифугирования.
Техника посева на микобактерии туберкулеза. Центрифугируется весь материал методом накопления при 1500 — 2000 об/м. Засевается весь осадок. Если материала много, то рекомендуется центрифугировать в 3-х пробирках и засевать каждую центрифужную (бактериологическую) пробирку в отдельные пробирки с питательными средами.
3асеянные пробирки кладут в термостат на 2—3 дня в горизонтальном положении, а па 3—4-й день ставят в вертикальное положение. Просмотр проводится с интервалом 7 дней для удаления проросших пробирок и для выявления начального роста микобактерий.
ДАЛЬНЕЙШЕЕ НАБЛЮДЕНИЕ ПОСЕЯННЫХ НА МБТ ПРОБИРОК
Рост микобактерий туберкулеза чаще наблюдается на 3—4-й неделе, однако возможен как более ранний, так и более поздний рост. Поэтому посевы выдерживают в термостате до 75—90 дней, мочу до 150 дней, после чего в случае отсутствия роста дают отрицательный ответ. Для выдачи отрицательного ответа нет необходимости его писать на специальном бланке, а достаточно поставить штамп «Посев отрицательный» и дату выдачи ответа на бланке направления, что значительно экономит и освобождает рабочее время лаборанта.
При просмотре посевов удаляют проросшие посторонней микрофлорой пробирки. Если в течение 45 дней из трех прорастает две пробирки, то лечащим врачам делается ответ «Пророст, повторить».
0бычно колонии туберкулезной культуры бывает сухие, морщинистые, цвета слоновой кости, но иногда встречаются влажные и пигментные колонии. В таких случаях нужно уметь дифференцировать МБТ от сапрофитов и атипичных микобактерий.