Реакция связывания комплемента (РСК).
Еще одной разновидностью реакций лизиса является реакция связывания комплемента (РСК).
В РСК помимо антигена и антител принимает участие комплемент, который способен связываться с комплексом антиген-антитело. РСК позволяет выявлять антигены при использовании известных антисывороток или антитела с помощью антигенов-диагностикумов.
Образование комплексов антиген-антитело и фиксация комплемента не сопровождаются видимыми изменениями. Для обнаружения связывания комплемента используют дополнительную индикаторную гемолитическую систему (рис. 5.4.)
 |
АГ – антиген; АТ – антитела; С – комплемент; Э – эритроциты барана; ГА – гемолитическая сыворотка. Объяснения в тексте.
Рис. 5.4. Схема реакции связывания комплемента
Гемолитическая система состоит из эритроцитов барана, обработанных гемолитической сывороткой против эритроцитов барана. Эту антисыворотку предварительно прогревают при 56°С 30 мин для разрушения ее комплемента. В присутствии комплемента (сыворотки морской свинки) происходит лизис этих эритроцитов.
Принцип метода состоит в том, что если в опытной системе образовался комплекс антиген-антитело, который связал добавленный комплемент, то не будет лизиса эритроцитов в индикаторной гемолитической системе (РСК положительная, выявлен антиген или антитело). Если в опытной системе комплекс антиген-антитело не формируется, комплемент остается свободным, взаимодействует с гемолитической системой и вызывает лизис эритроцитов (РСК отрицательная, есть гемолиз, см.)
РСК лежит в основе реакции Вассермана, которая применяется для диагностики сифилиса. Также она используется для иммунодиагностики эпидемического сыпного тифа.
Реакции нейтрализации экзотоксинов и вирусов
Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образования комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства.
Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.
Токсины получают путем фильтрования жидкой питательной среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при температуре 370С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.
Разработано несколько вариантов реакции нейтрализации токсинов.
Реакция флоккуляции основана на способности токсина или анатоксина при смешивании в эквивалентных соотношениях с антитоксической сывороткой образовывать помутнение в пробирке. Механизм флоккуляции аналогичен механизму реакции преципитации. Используют для количественного определения токсинов или антитоксинов.
Реакция нейтрализации токсинов in vivo.
Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают, что указывает на вид токсина.