Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам
Наиболее распространен в клинической и лабораторной практике.
Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток.
а) Необходимое оснащение
• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) — бесцветная (серая), А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — ярко-желтая.
• Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(П), В(Ш), AB(IV).
• Изотонический раствор хлорида натрия.
• Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).
б) Техника проведения реакции
1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютииирующие сыворотки I, II, Ш групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель.
2. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.
3. После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд.
4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.
При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.
Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации (холодовая агглютинация, пангглютинация, аллергия) необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), A(II) и B(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).