4.4 Методы, используемые для определения гуморальных реакций иммунитета
4.4.1 Реакция гемагглютинации
Принцип метода. Гемаггютинация – обусловленное реакцией АГ-АТ видимое слипание эритроцитов.
Реакция ставиться в 96-луночных круглодонных полистероловых планшетах для РНГА.
Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок. Учет реакции агглютинации проводят следующим образом:
«-» – отрицательная, характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»;
«+» – слабая, характеризуется небольшими одиночными отложениями на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки;
«++» – средней интенсивности – на дне лунки образуется «широкое плотное кольцо» из неагглютинированных эритроцитов;
«+++» – интенсивная – агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами;
«++++» – резко интенсивная, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее «+++», то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.
4.4.2 Иммунодиффузия
Выделяют следующие разновидности иммунодиффузии:
- Простая одномерная и простая двухмерная радиальная.
- Двойная одномерная; двойная двухмерная радиальная и двойная двухмерная радиальная угловая.
Принцип метода. Иммунодиффузия основана на способности образования линий преципитации в геле при взаимодействии специфического АГ с АТ.
4.4.3 Иммуноферментный анализ (ИФА)
Принцип метода. АГ или АТ, вступающее в иммунную реакцию, метится ферментом. По превращению субстрата ферментом можно судить о количестве вступившего во взаимодействие компонента реакции АГ-АТ.
В качестве примера приведем схему «сендвич – ИФА» (метод двойных антител для определения антигена):
1 – сенсибилизация планшета АТ (АТ связываются с твердой фазой);
2 – отмывка;
3 – добавление АГ;
4 – инкубация с пробой, содержащей АГ;
5 – отмывка;
6 – добавление антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена;
7 – инкубация с конъюгатом АТ – фермент;
8 – отмывка;
9 – инкубация с субстратно-индикаторной смесью и измерение количества продукта реакции: качественно (по изменению цвета) или количественно (на ИФА-анализаторе).
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1 Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. – Иммунология. М.: Медицина, 2000. – 432 с.