5 Краткая характеристика методов оценки Т- и В-лимфоцитов
Все лабораторные методы по оценке Т- и В-лимфоцитов можно разделить на качественные и количественные.
Для количественного определения в крови В-лимфоцитов используют:
• метод розеткообразования с эритроцитами мыши (ЕАС-РОК);
• применение флюоресцирующих МкАТ к рецепторам В-клеток (CD19, CD20, CD21 и т.д.) путем последующей оценки результата реакции метод флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии.
• метод магнитной иммуносепарации, основанный на использовании МкАТ, обработанных полистероловыми магнитными частицами, к рецепторам В-лимфоцитов.
Для количественного определения в крови Т-лимфоцитов используют:
• метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е- РОК);
• применение флюоресцирующих МкАТ к рецепторам Т-клеток (CD3, CD4, CD8, CD25) путем последующей оценки результата реакции метод флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии.
• метод магнитной иммуносепарации, основанный на использовании МкАТ, обработанных полистероловыми магнитными частицами, к рецепторам Т-лимфоцитов.
• цитотоксические тесты – для определения Т-киллеров.
Функциональную активность Т- и В-клеток можно оценить:
• в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на различные Т- и В-митогены. РБТЛ основана на феномене активации лимфоцитов под влиянием стимулов (митогенов или антигенов) с последующей трансформацией их в бласты (большие делящиеся клетки). Эта реакция определяет пролиферативный потенциал изучаемых клеток.
В качестве активаторов РБТЛ обычно используют фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А (Кон А), митоген лаконоса (МЛ), бактериальные липополисахариды (ЛПС), ферменты, стафилококковый экстракт и др. ФГА и Кон А стимулируют преимущественно Т-лимфоциты, поэтому до появления тестов розеткообразовання бласттрансформацию с этими митогенами использовали для количественной оценки популяции Т-клеток. Липополисахариды (например, Е. coli, сальмонелл и др.), антитела к иммуноглобулинам, очищенный белковый дериват туберкулина, декстраны стимулируют бласттрансформацию преимущественно В-клеток. Митоген лаконоса стимулирует клетки обоих типов. Таким образом, подбирая митогены, можно изучать функциональную активность отдельных субпопуляций лимфоцитов; подбирая оптимальные условия проведения реакции, можно в принципе давать количественную оценку содержания Т- и В-лимфоцитов в общей популяции.
• в реакции торможения миграции лейкоцитов (лимфоцитов) – РТМЛ. Подвижность лейкоцитов периферической крови, их миграция к очагам тканевой деструкции, хемотаксис к ауто- и гетероантигенам, перераспределение между лимфоидными органами при стрессорно-адаптивных реакциях являются составляющей компонентой общей системы реактивности, способности к сохранению постоянства внутренней среды. Сенсибилизированные к определенному антигену лимфоциты резко снижают скорость подвижности в среде, в которую вносят этот антиген. Реакция осуществляется при непосредственном взаимодействии антигенспецифических рецепторов с антигеном, а также через воздействие фактора, ингибирующего миграцию клеток, выделяющегося при контакте со специфическим антигеном. Этот феномен позволяет продемонстрировать органоспецифическую клеточно-опосредованную гиперчувствительность.
• путем определения, например, методом проточной цитофлуориметрии уровня содержания в крови отдельных функциональных цитокинов, выделяемых различными клетками иммунной системы.