По химическому составу и механизму действия противовирусные средства разделяются на три группы:1) химиопрепараты; 2) интерфероны; 3) индукторы интерферонов.
Химиопрепараты. К противовирусным химиопрепаратам относятся аномальные нуклеозиды, производные адамантана, синтетические аминокислоты, аналоги пирофосфата, тиосемикарбазоны и другие вируцид-ные препараты. Средства в большинстве своем эффективны при лечении гриппа и герпетической инфекции. К ним, к сожалению, быстро формируется резистентность, что существенно влияет на результаты лечения.
Интерфероны. Интерфероны (ИНФ) относятся к биологическим противовирусным неспецифическим средствам. Они представлены практически во всех клетках организма и направлены на подавление репликации вирусов, их элиминацию и санацию организма. Механизм противовирусного действия ИНФ связан с блокадой синтеза вирусоспецифических белков путем распознавания и дискриминации информационных РНК.
Препараты ИНФ делятся по составу на альфа-, бета- и гаммаинтерфероны, а по способу получения — на природные человеческие, лейкоцитарные (первого поколения) и рекомбинантные ИНФ (второго поколения).
Со времени появления ИНФ стали вызывать большой интерес с точки зрения как профилактики, так и лечения вирусных заболеваний. Результаты исследований показали, что ИНФ эффективны для лечения вирусных гепатитов, герпеса, острых респираторных инфекций, ВИЧ-инфекции и некоторых других заболеваний
Индукторы интерферона представляют собой весьма разнообразную группу, высоко- и низкомолекулярных природных и синтетических соединений, способных вызвать образование интерферона в организме больного. В настоящее время имеются данные о целесообразности использования в комплексной терапии следующих индукторов интерферона: флуореонов, аналогов госсипола, сополимеров пирана, неовира и др. при
герпетическом заболевании глаз, гриппе, риновирусной инфекции и прочих заболеваниях
18.Действие физических и химических факторов на вирусы.
Для защиты от воздействия внешних факторов(температуры, излучений (ионизирующего, рентгеновского, ультрафиолетового и светового), ультразвука, давления, рН среды, формалина, гидроксиламина, органических растворителей, фенола и др. ) у вирионов есть белковая оболочка. В зависимости от ее строения и хим состава один и тот же фактор может разрушать одни вирионы полностью, другие частично, а на третьи совершенно не оказывать влияния.
Например, в кислой среде (рН 3,0…6,0) большая группа миксомирусов проявляет значительную устойчивость, а некоторые вирусы из семейства Picornaviridae быстро инактивируются. Такое же явление наблюдают по отношению к органическим растворителям: те вирионы, в оболочках которых нет липидов, устойчивы к этим веществам, а липидосодержащие вирусы быстро разрушаются при их воздействии.
Избирательная чувствительность вирусов к физико-химическим факторам – это свойство, которое передается по наследству.
Инактивация вирусов означает полную или частичную утрату их биологической активности , которая наступает в результате действия физико-химических факторов.
Все агенты химической и физической природы вызывают изменения в оболочке. Характер и степень этих изменений зависят от природы инактивирующего фактора, его дозы, продолжительности действия и от вида вируса.
При инактивации вируса может происходить или расщепление (гидролиз) белков оболочки или коагуляция и уплотнение белков. Расщепление и распад белковой оболочки наблюдают у вирусов при инактивации их в кислой и щелочной среде.
Коагуляция и уплотнение белковой оболочки вирусов происходят при воздействии на них формальдегида, высокой (выше 700С) температуры или фенола. Механизм инактивации вирусов формальдегидом зависит от концентрации и продолжительности воздействия: высокие конц вызывают быструю коагуляцию и уплотнение белков, формальдегид не успевает проникнуть внутрь вириона, и вирусная нуклеиновая кислота сохраняет свою инфекционность. При низких конц идет наруш нукл кислоты и она теряет свои инфек св-ва. Такой же мех-м при воздействии высоких температур, а также раствора карболовой кислоты.
В целях инактивации вирусов были испытаны химические и физические агенты, которые действуют преимущественно на нуклеиновую кислоту: I-пропиолактон, гидроксиламин, УФ, некоторых красителей – действуют на нукл к-ту - сильно повреждают ее - вирус теряет свои инфекционные свойства.
Для уничтожения вирусов используют кипячение, сухой жар, автоклавирование, УФ, растворы фенола, едкого натра, лизола (2…5%), особенно горячие (70…900 С).
К антибиотикам вирусы не чувствительны.
Консервируют с помощью глицерина( пересылка пат материала для диагностич исслед, вирус сохр свои св-ва до года), замораживание( -40гр и ниже сохр от неск месс до неск лет) и высушивание( вирус матер-л замораж, затем в вакууме высушив до неск лет).
19. Механизм и использование в вирусологии ПЦР и ДНК-зондов.
ПЦР. Для вирусологической диагностики этот метод стал одним из главных. ПЦР позволяет выявить в исследуемом патматериале наличие специфического участка ДНК или РНК, характерного для исследуемого организма и многократно разможить его – амплифицировать. Амплификация – изолированное размножение гена или его фрагментов. Этапы:
1. Выделение ДНК. Готовят суспензию, обрабатывают, очищают.
2. Собственно амплификация. При этом изменяют температурный режим, и процесс идет стадийно:
1) Плавление ДНК – 92 градуса – расплетение нитей;2) Отжиг праймеров; 3) Достройка комплементарных цепей
3. Детекция. Учет результатов. Получение окончательного результата проводят с помощью электрофареза, результаты – на мониторе компьютера. Всегда сравнивают полученный результат сравнивают с контрольными положительными и отрицательными контрольными образцами. Выявляют продукт амплификации с помощью ДНК-зондов.
Преимущества: высокая чувствительность, достаточно 10 вирусных частиц; высокая специфичность; быстрота получения результата
Разработан метод ПЦР в реальном времени. Регистриты можно регистрировать в любой момент времени при прохождении этой реакции. Для выявления продуктов амплификации используют флюоресцентные ДНК-зонды. К зонду присоединены 2 химических соединения – флюоресцентная метка и гаситель флюоресценции. В ходе ПЦР происходит разъединение флюоресцентной метки и гасителя. Это приводит к появлению свечения. Регистрируя интенсивность свечения можно узнать о ходе реакции.
ДНК-зонды. С помощью ДНК-зонда можно обнаружить вирусные нуклеиновые кислоты в любом материале от больных животных. Для этой цели пригоден как свежий материал (ткани, смывы, кровь), так и высушенный, мороженный и даже частично разложившийся.
Кратко метод ДНК-зондов сводится к следующему:
1. Получение одноцепочного фрагмента ДНК определенного вируса (ДНК-зонда) и его метка.
2. Выделение из патологического материала нуклеиновых кислот и их денатурация (расплетение двухцепочных молекул на одноцепочные).
3. Контакт образовавшихся одноцепочных молекул ДНК (или РНК) с ДНК-зондом при 55˚С, приводящий к образованию двухцепочных молекул (молекулярная гибридизация) в случаях их взаимной комплементарности.